Dosaje de Progesterona

El fundamento de la utilización de la determinación hormonal se basa en los niveles de progesterona en sangre. La ovulación ocurre 48 horas (rango de 24-72 horas) después del pico de LH, la maduración ovocitaria se da 2-3 días pos ovulación, y el momento de fertilidad máxima es entre 2 y 5 días pos ovulación. Debido a esto, se necesitará determinar exactamente el momento del pico de LH, pero esto es muy difícil debido a su corta vida media en sangre (1-3 días). Por esto anterior, se definió el uso de los niveles de progesterona en sangre como método para determinar el momento óptimo, ya que presenta 0.5 ng/ml en etapas basales y a las 48 horas antes del pico de LH, esta aumenta a niveles entre 2-5 ng/ml a más de 40 ng/ml (en 5 días, promedio), manteniéndose elevada durante el estro hasta alcanzar los valores máximos en los 13-28 días de finales esta etapa.

La velocidad a la que se produce este incremento puede variar de una perra a otra o, en una misma perra, de un ciclo a otro. El 80% de las perras ovulan hacia el día 12 del estro, pero en el resto, la ovulación puede ser más precoz o más tardía, en particular en algunas razas, como el Doberman (en la que con frecuencia la progesterona aumenta muy lentamente) y el Pastor Alemán. Se considera habitualmente que la ovulación ha tenido lugar cuando la concentración plasmática de progesterona sobrepasa 15 ng/ml (hay que tener cuidado con las variaciones entre laboratorios debidas a diferencias en los métodos analíticos empleados) y que, por lo tanto, la cubrición o la inseminación deben tener lugar durante las 48 h siguientes, habida cuenta del tiempo de maduración de los óvulos y de la necesidad de repetir la monta dos días más tarde

La técnica más exacta para la determinación de éstas hormonas en sangre es la dosificación mediante Radio Inmuno Análisis, pero es caro y demora de 2-3 horas. Teniendo en cuenta los kits semicuantitativos (ELISA), se tomarían las muestras de sangre cada 2 días, a partir del día 7 del inicio del proestro, y el resultado se obtiene a los 15-30 minutos por cambios de color. Si el nivel de progesterona es alto indica que la hembra ya ovuló y esto determina que la monta deba ser inmediatamente para un resultado eficaz.

Resultado	Acción
< 5 ng/ml	otra muestra en 48 hs
5-6 ng/ml (16-20 nmol/L)	monta entre 33-57 horas
6-12 ng/ml (20-38 nmol/L)	monta a las 24 hs (9 a 33 hs)
> 12 ng/ml  (> 38 nmol/L)	monta en el día (9 hs)

Actualmente seria más correcto expresarse  en nmol/L en lugar de ng/ml según el Sistema Internacional. Esto se logra multiplicando por el factor 3.18 el valor en ng/ml y así se obtiene el valor en nmol/L.

De esta manera, el criador cuenta con un indicador bastante preciso de la ovulación, que permite mejorar no sólo el porcentaje de apareamientos e inseminaciones exitosas, sino también la prolificidad. En efecto, las camadas pequeñas, atribuidas a menudo a la edad de la perra o a una producción ovular insuficiente, sólo se deben a veces a una incorrecta elección del momento del apareamiento.

Gestación

La duración de la gestación es de 63 días (rango de 54-72 días) con relación a la monta, lo que es variable. Pero si relacionamos la fecha del parto con el pico de LH, es de 65 días (+/- 1 día). La progesterona se mantiene en meseta (2 ng/ml) y el estrógeno aumenta en el último tercio de la gestación (Concannon, 1989). Durante la gestación se modifica el cuerpo de la perra, aumentándose de peso con una variación de un 20-55%, destacándose mas al final de la preñez, también hay desarrollo mamario y cambio en la silueta. Los valores de Progesterona descienden por debajo de 2 ng/ml 36 a 48 horas antes del parto.

Determinación del momento propicio para practicar una cesárea

Las dificultades del parto (distocia) propias de la mayoría de las razas braquicéfalas (de cara chata), como el Bulldog o el Pekinés, llevan a menudo a los criadores a planificar una cesárea. Cuando se practica demasiado temprano, los cachorros son prematuros y suelen morir por insuficiencia respiratoria pocas horas después de nacer. Si se realiza demasiado tarde, la permanencia prolongada de los fetos en el canal del parto ocasiona anoxia cerebral. En la especie canina, la viabilidad de los fetos está condicionada por la aparición tardía del agente tensioactivo pulmonar (surfactante), que determina al nacer la función respiratoria de los cachorros. Esta maduración pulmonar es, precisamente, simultánea a la disminución de la concentración de progesterona en sangre de la madre observada en los días previos a la fecha ideal del parto. De esta manera, el veterinario dispone, mediante la simple determinación de esta concentración en la perra gestante, de un valioso medio para determinar con exactitud si las crías están preparadas para sobrevivir a la cesárea. Gracias a esta técnica ha aumentado la tasa de supervivencia de los cachorros nacidos por esta vía, en especial en la raza Bulldog, en la que se estima que más de un 90% de los nacimientos tienen lugar por cesárea.


Bibliografía:

• GRANDJEAN D, PIERSON P, CACCIANI F, PAWLOWIEZ S, MICHALLET T. "Guía práctica para la crianza canina". 1999 Groupe Royal Canin. 2003 Tercera Edición - Aniwa Publishing.
• Barr FJ."Pregnancy diagnosis and assessment of foetal viaability in the dog: a review". Journal Small Animal Science 29:647-656. 1988.
• Boyd JS,Renton JP, Harvey MJA, Eckersall PD y Ferguson JM."Problem associated with preovulatory luteinization in the bitch". Biology of Reproduction 13:51-58. 1977.
• Concannon PW, McCann JP y Temple M."Biology and endocrinology of ovulation pregnancy and parturition in the dog". Journal of Reproduction and Fertility. 39:3-25. Suppl. 1987.
• Feldman EC y Nelson RW."Canine and feline endocrinology and reproduction". Peterson D, editor. Philadelphia: WB Saunders, 14:399-480. 1987.
• Haaften B van, Diekman SJ, Ockens AC y Willense AH. "Timing the mating of dogs on the basics of blood progesterone concenttration". Veterinary Record 61:771. 1989.
• Jeffcoate IA y Lindsay FEF. "Ovulation detection and timing of insemination based on hormonal concentrations, vaginal citology and the endoscopic appearence of the vagina in the domestic bitches". Journal of Reproduction of Fertility 39:277-287. Suppl. 1989. 
• Linde-Forsberg C. "Monitoreo preciso del ciclo estral de la perra para la inseminación artificial". En: Inseminacion Artificial en Caninos. Editor Facultad de Veterinaria. 1996
• Pineda, MH "Sistema reproductor de la hembra", En: Endocrinología Veterinaria y Reproducción, Ed: L.E. McDonald. pp. 294-344. 1991.
• Olson PN, Johnston SD, Root MV y Hegstad RL. "Termintong pregnancy in dogs and cats". Animal Reproduction Science 28:399-406. 1992.  
• Protocolos Diagnósticos Vet Lab Laboratorios (Barcelona) http://www.vetlabsl.com/nueva3/protocolosdiagnosticos.htm 
• Gráficos: Universidad de Córdoba (España), Facultad de Veterinaria 

Citología vaginal

La citología vaginal es uno de los métodos indirectos más difundido, por ser simple y rápido. Para obtener buenos resultados habría que inspeccionar la vagina cada dos días, desde el quinto día de iniciado el proestro.

Después de observar la hinchazón vulvar y pinzar la comisura hacia abajo, se introduce verticalmente un hisopo hacia la pared superior de la vagina, para evitar la fosa del clítoris. Cuando se alcanza la parte superior y más profunda de la vagina, se coloca el hisopo en posición horizontal y se introduce lo más lejos posible, sin forzar. Se recogen entonces alrededor del cuello uterino, con movimientos circulares, las secreciones y las células provenientes de la exfoliación del epitelio cervical.

Observación directa del hisopo: Se examina el aspecto del hisopo, que es habitualmente rojo al comienzo del celo, rosado o incoloro al finalizar el pro estro y purulento en caso de infección vaginal o uterina.

Extendido del frotis: Se hace rodar delicadamente el extremo del hisopo sobre un portaobjetos previamente desengrasado, cuidando de no pasar dos veces por el mismo lugar, para no crear agregados de células.

Fijación del frotis: La muestra se puede fijar con un fijador para células, para enviarla al veterinario para que realice el examen, o se puede teñir y realizar un examen inmediato.

Tinción: las técnicas son muy variadas; mencionaremos solo algunas: Giemsa, Azul de Metileno, Writh, Shorr, Leishman. Cualquiera de ellos es un buen método de coloración Hay técnicas de coloración diferencial que tiñen de color diferente los distintos tipos celulares y para el operador sin mucha experiencia son de gran ayuda

Observación del frotis: se realiza en microscopio óptico común. Con la visión panorámica ya se tiene una idea aproximada del tipo celular predominante, sobretodo si se utiliza una técnica de coloración diferencial. Con mayor aumento se hace una correcta evaluación del frotis.

Tipos celulares:

• Células parabasales, redondeadas de núcleo claro y grande.
• Células intermedias, mas grandes, el núcleo comienza a desdibujarse, redondeadas al principio ( pequeñas intermedias) van endureciendo sus bordes y aumentando de tamaño (grandes intermedias).
• Células superficiales, son queratinizadas, de bordes filosos a veces plegados sobre si mismos, con núcleos picnóticos o sin núcleos.
• Otros tipos celulares: leucocitos, eritrocitos, bacterias.

Existen diversas técnicas de coloración, que aportan información complementaria:

• Las tinciones monocromáticas (por ejemplo, con azul de metileno, 5.5.5) brindan información acerca de la forma de las células, pero colorean el citoplasma (espacio intra celular) de todas las células de manera idéntica. Por ejemplo, la tinción de May-Grunwald-Giemsa permite diagnosticar una infección al revelar la presencia de glóbulos blancos polimorfonucleares (células que aparentan poseer varios núcleos).
• La tinción de Harris-Schorr, más larga y tediosa, aporta sin embargo datos mucho más completos que las coloraciones precedentes. La observación debe centrarse en: el aspecto del fondo del frotis ("sucio" y cubierto de glóbulos rojos al inicio del proestro que se aclara paulatinamente hasta el estro).
• El aspecto de las células, las cuales, paulatinamente, adquieren el aspecto de "patatas fritas" cornificadas (queratinizadas) y cambian de color, pasando de azul (basófilo), al principio del celo, a rojo (acidófilo) durante el estro; esta observación permite estimar el grado de eosinofilia del frotis (porcentaje de células vaginales rojas).
• La tendencia progresiva de las células a formar agregados.
• La presencia eventual de células parabasales (ovoides y azules), que indica el viraje del frotis; o de polimorfonucleares (raros en período del estro) o incluso de espermatozoides.

CARACTERISTICAS DEL FROTIS DURANTE EL CICLO

Anestro: se ven células parabasales e intermedias. Los glóbulos rojos y las bacterias están generalmente ausentes, y los neutrófilos pueden o no estar presentes.

Anestro

Proestro: se ven células parabasales en gran cantidad, algunas intermedias, leucocitos y eritrocitos.

Proestro

Estro: Gran numero de células superficiales cornificadas (queratinizadas) acidófilas que aumenta a medida que avanza esta etapa, células intermedias que disminuyen a medida que avanza la etapa, no hay presencia de leucocitos.

Estro

Metaestro: Disminuyen hasta desaparecer las células superficiales y aumentan las parabasales y vuelven a aparecer los leucocitos.

Postestro (Metaestro)

Los frotis vaginales son muy útiles en el campo de la cría de perros, tanto por sus indicaciones como por la facilidad con que se practican, su rapidez y su bajo costo. Sin embargo, cuando la interpretación de un frotis resulta dudosa o no concuerda con los datos clínicos (por ejemplo, en las perras Chow-chow, que presentan a menudo una queratinización precoz de las células vaginales), o cuando es importante determinar con exactitud el momento de la ovulación para desplazar a la perra para una cubrición o realizar una inseminación, el criador puede completar este análisis con un medio más preciso, la determinación de la concentración de progesterona en la sangre.



Bibliografía:

• GRANDJEAN D, PIERSON P, CACCIANI F, PAWLOWIEZ S, MICHALLET T. "Guía práctica para la crianza canina". 1999 Groupe Royal Canin. 2003 Tercera Edición - Aniwa Publishing.
• Barr FJ."Pregnancy diagnosis and assessment of foetal viaability in the dog: a review". Journal Small Animal Science 29:647-656. 1988.
• Boyd JS,Renton JP, Harvey MJA, Eckersall PD y Ferguson JM."Problem associated with preovulatory luteinization in the bitch". Biology of Reproduction 13:51-58. 1977.
• Concannon PW, McCann JP y Temple M."Biology and endocrinology of ovulation pregnancy and parturition in the dog". Journal of Reproduction and Fertility. 39:3-25. Suppl. 1987.
• Feldman EC y Nelson RW."Canine and feline endocrinology and reproduction". Peterson D, editor. Philadelphia: WB Saunders, 14:399-480. 1987.
• Haaften B van, Diekman SJ, Ockens AC y Willense AH. "Timing the mating of dogs on the basics of blood progesterone concenttration". Veterinary Record 61:771. 1989.
• Jeffcoate IA y Lindsay FEF. "Ovulation detection and timing of insemination based on hormonal concentrations, vaginal citology and the endoscopic appearence of the vagina in the domestic bitches". Journal of Reproduction of Fertility 39:277-287. Suppl. 1989.
• Linde-Forsberg C. "Monitoreo preciso del ciclo estral de la perra para la inseminación artificial". En: Inseminacion Artificial en Caninos. Editor Facultad de Veterinaria. 1996
• Pineda, MH "Sistema reproductor de la hembra", En: Endocrinología Veterinaria y Reproducción, Ed: L.E. McDonald. pp. 294-344. 1991.
• Olson PN, Johnston SD, Root MV y Hegstad RL. "Termintong pregnancy in dogs and cats". Animal Reproduction Science 28:399-406. 1992.
• Protocolos Diagnósticos Vet Lab Laboratorios (Barcelona) http://www.vetlabsl.com/nueva3/protocolosdiagnosticos.htm

Detección de la ovulación

Cuando el semental seleccionado no pertenece al criadero, y dado que existe la costumbre de que sea la hembra quien se desplace al lugar de residencia del macho para la monta, hay que determinar el momento propicio para el apareamiento, a fin de optimizar las probabilidades de lograr la fecundación y evitar desplazamientos y gastos inútiles. Lo ideal es que el apareamiento o la inseminación tengan lugar dentro de las 48 h siguientes a la ovulación, para que la mayoría de los óvulos fecundables y de los espermatozoides puedan alcanzar el lugar del "encuentro" (los oviductos o trompas de Falopio) en el mejor estado posible. Después de su maduración, los óvulos siguen siendo fecundables durante un lapso de 2 días. Esto explica que puedan producirse sobrefecundaciones por dos machos diferentes en la especie canina. Si se tiene en cuenta el lapso de supervivencia de los espermatozoides, puede decirse que el criador cuenta con cierto margen de seguridad.
Para detectar el período de ovulación en una perra en celo, el criador cuenta con diversos medios de precisión variable que resultan complementarios:

• El apareamiento practicado sistemáticamente diez días después de las primeras pérdidas de sangre y repetido dos días más tarde es un método práctico para el criador. Sin embargo, alrededor del 20% de las perras ovulan fuera de este período, de manera que no son fecundadas o sólo procrean unos pocos cachorros, lo cual representa un evidente "lucro cesante".
• Las pérdidas vulvares de color más claro que aparecen después del sangrado señalan, por lo general, el fin del proestro, pero no son un indicio confiable de ovulación, puesto que algunas hembras, pueden presentar pérdidas sanguíneas hasta el final del estro.
• La receptividad sexual y la lateralización de la cola tampoco son exclusivas de la ovulación. Muchas perras se dejan también cubrir en otras ocasiones (durante el seudocelo del parto, en caso de infecciones urinarias, en caso de ninfomanía secundaria a la secreción de estrógenos por un quiste folicular -quiste ovárico secretor-).
• La resistividad del moco vaginal suele disminuir inmediatamente después de la ovulación, lo que indica el fin del período de impregnación estrogénica y, por lo tanto, la rápida renovación de las células vaginales. Lamentablemente, su medición brinda una posibilidad diagnóstica demasiado tardía para ser utilizada en la cría de perros, ya que resulta más útil prever la inminencia de la ovulación que asistir al hecho consumado. Por esta razón, sumada al costo de los galvanómetros y al riesgo considerable de contaminación entre perras, este método prácticamente no se usa en los criaderos.
• Las tiras reactivas que permiten detectar las variaciones de la concentración de glucosa en el moco vaginal son difíciles de introducir lo suficientemente lejos en la vagina como para evitar la dilución con orina. Los resultados son generalmente imprecisos (se observa cambio de color durante los tres días anteriores o posteriores a la ovulación) y, por lo tanto, poco fiables.
• Según la tinción utilizada, los frotis vaginales permiten visualizar directamente el cambio de aspecto de las células vaginales, el cual se correlaciona con las variaciones hormonales, en especial con la variación en la concentración de estrógenos.(VER MAS SOBRE CITOLOGÍA VAGINAL)
• Determinación de progesterona en la sangre (VER MÁS SOBRE DOSAJE DE PROGESTERONA)

La realización conjunta de frotis vaginales y determinaciones de progesterona, con buen criterio y siguiendo un protocolo preciso, permite llevar a cabo un seguimiento del celo muy satisfactorio y económicamente rentable, que conduce a un aumento de la fertilidad y la prolificidad, y una disminución del número de desplazamientos inútiles para apareamientos improductivos.

Bibliografía:

• GRANDJEAN D, PIERSON P, CACCIANI F, PAWLOWIEZ S, MICHALLET T. "Guía práctica para la crianza canina". 1999 Groupe Royal Canin. 2003 Tercera Edición - Aniwa Publishing.

Fisiología reproductiva hembras

Las perras se consideran monoéstricas estacionales ya que solo tienen un celo por estación reproductiva, primavera y otoño. Todavía existen confusiones en la subdivisión del ciclo estral en la perra. Inicialmente se planteó que el ciclo de la perra se puede dividir en cuatro fases según manifestaciones externas: Proestro, Estro, Metaestro y Anestro.

1. Proestro: A un período de inactividad sexual (anestro) sigue el proestro, que se identifica por aumento de tamaño de la vulva y un corrimiento muco hemorrágico (comienzo del sangrado). Aunque la perra atrae a los machos por medio de jugueteos y escapes, tiene la vagina tapada con la cola y no acepta la monta mostrando los dientes. La duración media es de 9 días (rango de 2-27 días).

2. Estro: En el estro, es el período en el que la perra acepta la monta, la vulva está aún más aumentada de tamaño y turgente, y el corrimiento vulvar es de color pajizo. La duración media es de 9 días (rango 3-21 días). En lo que es comportamiento cambia de agresiva a totalmente pasiva. Se produce en la transición del proestro al estro, el pico de LH y la ovulación ocurre a las 24 a 48 horas del pico, también se establece en la bibliografía que es aproximadamente a los dos días de comenzado el estro.(VER CÓMO DETECTAR OVULACIÓN)

3. Metaestro: Si no tiene lugar la gestación el estro es seguido del metaestro, donde la perra, ya no es atractiva para el macho por un efecto marcado de la elevada progesterona en sangre. La duración media de esta etapa metaestro es de 90 días (rango 60-110 días). Este último acaba en forma imperceptible en el anestro.

4. Anestro: Es un período de inactividad sexual, cuya duración es variable con una media de 75 días.

La duración de cada fase del ciclo estral puede ser variable. Sólo la fase del post-estro (todavía llamada, a veces, metaestro o diestro), correspondiente a los perídos de gestación y lactancia, tiene una duración relativamente estable (120 +/- 20 días). El celo, que abarca las fases de proestro y estro, dura, en promedio, tres semanas, pero esta duración depende del momento en que se produce la ovulación, variable de una perra a otra, y, en una misma perra de un ciclo a otro. De manera que si una perra ovula una vez 12 días después de las primeras pérdidas de sangre, no hay que suponer que en el ciclo siguiente la ovulación se producirá después del mismo plaso. En efecto, alrededor del 20% de las perras ovulan de manera más precoz o más tardía.
El intervalo normal entre dos ciclos varía entre 5 y 10 meses, dependiendo de la duración del anestro. Existe una variabilidad racial desde 4 meses de intervalo en el Pastor Alemán hasta una vez al año en el Basenji. La duración de la gestación es de 63 días, con una variabilidad de 54 a 72 días si se considera desde el momento de la monta.
Los ovarios de las perras comienzan a secretar progesterona algunos días antes de la ovulación. La concentración sanguínea de esta hormona aumenta entonces progresivamente, se produzca o no fecundación. Las determinaciones de progesterona permiten entonces detectar la ovulación, pero no la gestación.
El ovocito ovulado es aún inmaduro, por lo que necesita 2-5 días para completar la maduración y ser fecundable. Los espermatozoides que son originarios del semen fresco pueden permanecer viables por 4-5 días, pero si se utiliza semen congelado la viabilidad no supera las 12-24 horas, por lo que se debe ser muy exacto en la utilización del mismo, con relación al tiempo óptimo de inseminación artificial.
La pubertad se alcanza en el entorno de los 6 a 7 meses de edad (rango 4-22 meses). Las razas pequeñas tienden a presentar el primer celo a los 6-10 meses, pero las razas grandes comienzan a ciclar a los 18-20 meses de edad. Las perras ciclan a lo largo de toda la vida desde la pubertad, pero puede disminuir la fertilidad después de los 7 años de edad.
Existe una gran variedad individual en la duración de las diferentes etapas del ciclo estral así como en la intensidad de los signos externos de "celo". Además, el metaestro no presenta signos externos identificables, lo que imposibilita determinar con exactitud su inicio o finalización. Todo esto determina una gran dificultad para identificar las etapas del ciclo estral. Como herramienta de gran utilidad para salvar esa dificultad tenemos el examen del frotis vaginal o la determinación hormonal.

Control hormonal del ciclo

La actividad cíclica innata del hipotálamo constituye la base hormonal de control, y es sensible tanto a cambios externos como internos en el animal.
Durante el anestro los niveles de estrógeno oscilan entre 5-15 pg/ml y los de progesterona 0,5-1 ng/ml. La FSH es segregada durante las 2-3 semanas previas al inicio del proestro en pulsos de frecuencia creciente. Esta controla el desarrollo de los folículos, que a su vez segregan principalmente estrógenos, pero también progesterona, a medida que alcanzan la madurez.
Los niveles bajos de estrógenos causan un efecto rebote positivo sobre la adenohipófisis, estimulando a segregar FSH, que da lugar al crecimiento y desarrollo folicular y a su vez a niveles crecientes de estrógenos (niveles que oscilan entre 25-60 pg/ml durante el proestro). Este proceso continúa hasta la madurez de los folículos, cercano a la ovulación. Ya en esta fase, los altos niveles de estrógenos causan un efecto rebote negativo que inhibe la secreción de FSH y desencadena la liberación de LH en un gran pulso que determina la ovulación (2-4 ng/ml de progesterona). La ovulación se da entre 3-27 días pos inicio del proestro con niveles de 4-10 ng/ml de progesterona en sangre, lo que plantea una enorme variación.
El folículo que ovuló, se transforma en un cuerpo lúteo, que segrega altos niveles de progesterona en sangre y a su vez ejerce un efecto rebote negativo sobre la secreción de LH, la cual mantiene al cuerpo lúteo hasta el día 35, pero los niveles decrecientes ejercen un efecto rebote positivo sobre la liberación de prolactina, que mantiene el cuerpo lúteo después del día 35. Los cambios hormonales en el ciclo de la perra pueden predisponer a dos patologías: Piómetra y Seudogestación.
Particularidades en la perra:

• Duración variable de cada etapa del ciclo estral.
• Antes de la ovulación hay bajos niveles de progesterona en aumento, producida por los folículos (luteinización preovulatoria) y niveles decrecientes de estrógeno, que determinan el inicio del estro.
• Maduración ovocitaria pos-ovulación.
• Hay un largo período de dominancia de la progesterona, ya que en el útero no se produce el factor luteolítico por lo que hay una luteólisis progresiva.
• Similitud de los ciclos en perras gestadas y no gestadas. 

Bibliografía:

• GRANDJEAN D, PIERSON P, CACCIANI F, PAWLOWIEZ S, MICHALLET T. "Guía práctica para la crianza canina". 1999 Groupe Royal Canin. 2003 Tercera Edición - Aniwa Publishing.
• Barr FJ."Pregnancy diagnosis and assessment of foetal viaability in the dog: a review". Journal Small Animal Science 29:647-656. 1988.
• Boyd JS,Renton JP, Harvey MJA, Eckersall PD y Ferguson JM."Problem associated with preovulatory luteinization in the bitch". Biology of Reproduction 13:51-58. 1977.
• Concannon PW, McCann JP y Temple M."Biology and endocrinology of ovulation pregnancy and parturition in the dog". Journal of Reproduction and Fertility. 39:3-25. Suppl. 1987.
• Feldman EC y Nelson RW."Canine and feline endocrinology and reproduction". Peterson D, editor. Philadelphia: WB Saunders, 14:399-480. 1987.
• Haaften B van, Diekman SJ, Ockens AC y Willense AH. "Timing the mating of dogs on the basics of blood progesterone concenttration". Veterinary Record 61:771. 1989.
• Jeffcoate IA y Lindsay FEF. "Ovulation detection and timing of insemination based on hormonal concentrations, vaginal citology and the endoscopic appearence of the vagina in the domestic bitches". Journal of Reproduction of Fertility 39:277-287. Suppl. 1989. 
• Linde-Forsberg C. "Monitoreo preciso del ciclo estral de la perra para la inseminación artificial". En: Inseminacion Artificial en Caninos. Editor Facultad de Veterinaria. 1996
• Pineda, MH "Sistema reproductor de la hembra", En: Endocrinología Veterinaria y Reproducción, Ed: L.E. McDonald. pp. 294-344. 1991.
• Olson PN, Johnston SD, Root MV y Hegstad RL. "Termintong pregnancy in dogs and cats". Animal Reproduction Science 28:399-406. 1992.  
• Protocolos Diagnósticos Vet Lab Laboratorios (Barcelona) http://www.vetlabsl.com/nueva3/protocolosdiagnosticos.htm 
• Gráficos: Universidad de Córdoba (España), Facultad de Veterinaria